Plásmido Doble Nickase (m) CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2: sc-419723-NIC

Cnr2 codifica el receptor cannabinoide 2 (CB2), un GPCR acoplado a Gi/o enriquecido en linajes inmunitarios y mieloides que regula la quimiotaxis, la liberación de citocinas y el tono inflamatorio mediante la inhibición de la adenilil ciclasa y la modulación de las vías de señalización MAPK y PI3K/AKT. La activación de CB2 puede influir en la dinámica intracelular de Ca²⁺ y en el diálogo cruzado con programas transcripcionales dependientes de NF-κB, modulando las respuestas inmunitarias innata y adaptativa. En modelos murinos, la función de Cnr2 se analiza con frecuencia en contextos de neuroinflamación, procesamiento del dolor, inflamación metabólica y tráfico de células inmunitarias, donde cambios en la señalización del receptor pueden modificar los fenotipos de leucocitos residentes en el tejido e infiltrantes.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cnr2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cnr2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cnr2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cnr2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.