cathepsin Z CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403244

概要

CTSZはカテプシンZ（カテプシンX）をコードしており、エンド・リソソーム系における細胞内タンパク質のターンオーバーやペプチド処理に関与するリソソーム局在のシステインプロテアーゼです。カテプシンZは、RGDモチーフを介した相互作用や、細胞外環境を改変するプロテアーゼネットワークの形成を通じて、細胞接着および遊走を調節し得ます。その活性は免疫細胞における抗原処理や炎症シグナル伝達とも関連し、CTSZを自然免疫および獲得免疫応答を制御する経路と結び付けています。CTSZの発現または活性の異常は、腫瘍の浸潤性形質や、神経炎症・神経変性の文脈と関連付けられており、プロテオスタシスや免疫微小環境の機序研究における有用な標的となります。

cathepsin Z CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCTSZ遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CTSZ内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CTSZのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cathepsin Zタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cathepsin Zシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CTSZ欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cathepsin Zの機能に不可欠なCTSZエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CTSZゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cathepsin Z CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcathepsin Z CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CTSZ遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cathepsin Z HDRプラスミド（h）および cathepsin Z HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCTSZホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCTSZ標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。