cathepsin S CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419881

概要

Ctssは、マウスのカテプシンSをコードしており、抗原提示細胞で高発現し、取り込まれたタンパク質の加水分解（プロテオリティック）処理を担うリソソーム性システインプロテアーゼである。カテプシンSは、不変鎖（invariant chain）を切断してペプチドのロードを可能にすることでMHCクラスII抗原提示経路の鍵となる構成要素であり、エンドリソソーム系のプロテオスタシスを獲得免疫の活性化へと結び付けている。抗原処理にとどまらず、カテプシンSは骨髄系細胞系列において細胞外マトリックスの代謝回転や炎症シグナルにも寄与し、白血球の遊走や組織リモデリングの研究を支える。CTSS活性の破綻は免疫介在性の病態や慢性炎症状態と関連づけられており、免疫学および炎症モデルにおける機序研究を促している。

cathepsin S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCtss遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ctss内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ctssのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cathepsin Sタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cathepsin Sシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ctss欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cathepsin Sの機能に不可欠なCtssエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ctssゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cathepsin S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびcathepsin S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ctss遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cathepsin S HDRプラスミド（m）および cathepsin S HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCtssホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCtss標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。