CAT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403628

概要

SLC7A1 は CAT-1（陽イオン性アミノ酸トランスポーター1）をコードしており、L-アルギニン、L-リシン、L-オルニチンをナトリウム非依存的に取り込む高親和性の細胞膜トランスポーターです。CAT-1 は細胞内アルギニンの利用可能量を制御することで、一酸化窒素（NO）合成、ポリアミン代謝、ならびに栄養輸送を細胞増殖やストレス応答に結び付ける mTOR 系およびレドックス関連シグナル伝達に影響を与えます。また、CAT-1 の活性は、アルギニンのフラックスとそれに続く代謝プログラムの調節を通じて、血管内皮細胞や免疫細胞の機能にも寄与します。陽イオン性アミノ酸輸送の異常は、疾患に関連する細胞環境において、血管生物学の変化、炎症、代謝リモデリングの変調と関連づけられています。

CAT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC7A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC7A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC7A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CAT-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CAT-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC7A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CAT-1の機能に不可欠なSLC7A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC7A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CAT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCAT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC7A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CAT-1 HDRプラスミド（h）および CAT-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC7A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC7A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。