Plasmide CRISPR/Cas9 KO CARD 6 (h): sc-413684

Présentation

CARD6 (caspase recruitment domain family member 6) est une protéine adaptatrice humaine contenant un domaine CARD, impliquée dans la signalisation des récepteurs de reconnaissance de motifs (pattern-recognition receptors) et dans la modulation des réponses inflammatoires. Grâce à des interactions protéine–protéine médiées par le domaine CARD, CARD6 a été associée à la régulation de l’activité des voies NF-κB et MAPK en aval de la détection microbienne et de signaux de stress, influençant la production de cytokines et l’activation de l’immunité innée. Des altérations de la signalisation de CARD6 ont été évoquées dans le contexte d’une inflammation dérégulée et de physiopathologies liées au système immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la défense de l’hôte et les réseaux de signalisation inflammatoire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CARD 6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CARD6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CARD6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CARD6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CARD 6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CARD6 pour l'étude de la signalisation de CARD 6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CARD6 essentiels à la fonction de CARD 6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CARD6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CARD 6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CARD 6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CARD6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CARD 6 plasmide HDR (h) et le CARD 6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CARD6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CARD6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.