Plasmide CRISPR d'Activation (h) CARD 11: sc-402770-ACT

CARD11 (CARMA1) code une protéine d’échafaudage contenant un domaine de recrutement des caspases, qui relie la signalisation des récepteurs de l’antigène aux programmes transcriptionnels en aval dans les lymphocytes. Lors de l’engagement du récepteur des cellules T ou du récepteur des cellules B, CARD11 favorise l’assemblage du complexe CARD11–BCL10–MALT1 (CBM), permettant l’activation des voies NF-κB, JNK et p38 MAPK qui contrôlent la prolifération, la production de cytokines et la survie. Une activité dérégulée de CARD11 est associée à des défauts de signalisation immunitaire et à une activation aberrante des lymphocytes, et des altérations récurrentes ont été rapportées dans plusieurs hémopathies malignes lymphoïdes. En tant que nœud de signalisation, CARD11 est fréquemment étudiée pour disséquer la signalisation proximale des récepteurs, les événements de signalisation dépendants de l’ubiquitine et les conséquences transcriptionnelles au sein de l’immunité adaptative.

CARD 11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CARD11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CARD 11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CARD11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CARD11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CARD 11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CARD11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CARD 11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CARD 11 dans les cellules tumorales présentant une expression de CARD11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.