Carbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406552

概要

CBR3はカルボニル還元酵素3（carbonyl reductase 3）をコードしており、細胞質に局在するNADPH依存性の酸化還元酵素です。本酵素は、異物（キセノバイオティクス）代謝や酸化ストレスの過程で生じるアルデヒドやケトンを含む反応性カルボニル化合物の還元を触媒します。CBR3は細胞内のレドックスバランスとカルボニル解毒を調節することで、第I相／第II相の代謝過程に関与し、タンパク質・脂質・DNAを損傷し得る求電子性中間体の蓄積を抑えるのに寄与します。CBR3活性の差異は、内因性の脂質過酸化生成物や多様な低分子基質の処理の違いという観点から研究されており、本酵素がストレス応答や代謝適応に関わる経路と関連することが示唆されています。カルボニル還元酵素活性の変化は、レドックス状態や代謝物処理が細胞の生存や表現型に影響するがん生物学、薬理学、毒性学のモデルでしばしば検討されています。

Carbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCBR3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CBR3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CBR3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Carbonyl reductase 3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Carbonyl reductase 3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CBR3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Carbonyl reductase 3の機能に不可欠なCBR3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CBR3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Carbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCarbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CBR3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Carbonyl reductase 3 HDRプラスミド（h）および Carbonyl reductase 3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCBR3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCBR3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。