Cappuccino CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407008

概要

ヒトBLOC1S4は、リソソーム関連小器官形成複合体1（BLOC-1）の中核構成要素であるcappuccinoをコードしており、特殊化した小器官の成熟に必要なエンドソーム膜輸送およびカーゴ（貨物）選別を協調して制御します。BLOC-1の機能は、エンドソーム—リソソーム系を介した小胞の出芽、リサイクリング、タンパク質カーゴの輸送を支え、色素顆粒の生合成や、特殊化した細胞における分泌経路などのプロセスに影響を与えます。BLOC-1サブユニットの破綻は細胞内輸送や小胞動態を乱し、リソソーム関連小器官に関わる疾患に加えて、エンドソーム輸送機能不全に結び付いたより広範な神経発達・シナプス表現型とも関連します。そのためBLOC1S4は、エンドソームでのソーティング、小器官生合成、ならびに膜輸送の変化がもたらす経路レベルの影響という文脈で、一般に研究されています。

Cappuccino CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBLOC1S4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BLOC1S4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BLOC1S4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cappuccinoタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cappuccinoシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BLOC1S4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cappuccinoの機能に不可欠なBLOC1S4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BLOC1S4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cappuccino CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCappuccino CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BLOC1S4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cappuccino HDRプラスミド（h）および Cappuccino HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBLOC1S4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBLOC1S4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。