Plásmido CRISPR de Activación (h) Capicua: sc-406191-ACT

El gen humano **CIC** codifica **Capicua**, un represor transcripcional con dominio de unión al ADN tipo HMG-box que integra la señalización **RTK–RAS–MAPK/ERK** en programas de expresión génica dependientes del contexto. Capicua restringe la expresión de **ETS** y de otras dianas transcripcionales inmediatas, modulando la proliferación, la diferenciación y el compromiso de linaje al acoplar señales extracelulares con la represión asociada a la cromatina. La disrupción o atenuación de la represión mediada por CIC se ha vinculado con una salida alterada de MAPK y con la desregulación transcripcional observada en múltiples contextos tumorales, donde CIC puede funcionar como un freno molecular de la señalización oncogénica. Como resultado, CIC se estudia con frecuencia en la transcripción dependiente de señales, las transiciones de estado celular y los mecanismos de reconfiguración regulatoria de genes impulsada por vías de señalización.

Capicua El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CIC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Capicua El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CIC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CIC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Capicua. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CIC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Capicua en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Capicua en células tumorales con expresión de CIC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.