CAMP Double Nickase Plasmid (h): sc-400651-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CAMP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CAMP Double-Nickase-Plasmid (h) und CAMP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CAMP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LL-37: sc-166770
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CAMP Double Nickase Plasmid (h) | sc-400651-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CAMP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400651-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane CAMP-Gen kodiert das antimikrobielle Peptid Cathelicidin (LL-37), einen kationischen Effektormechanismus der Wirtsabwehr, der von Epithelzellen und Zellen myeloischer Abstammung produziert wird. CAMP trägt zu angeborenen Immunwegen bei, indem es mikrobielle Membranen direkt disruptiert und zudem die Signalübertragung von Mustererkennungsrezeptoren, die Chemotaxis sowie Zytokinantworten während Entzündungen moduliert. Über die antimikrobielle Aktivität hinaus beeinflusst LL-37 die Homöostase der epithelialen Barriere, Programme der Wundheilung und die Rekrutierung von Leukozyten in mukosalen Geweben. Eine dysregulierte CAMP-Expression wurde mit entzündlichen Haut- und Atemwegserkrankungen, einer veränderten Infektanfälligkeit sowie tumorassoziiertem immunologischem Remodeling in Verbindung gebracht und stellt damit einen hilfreichen Knotenpunkt für die Untersuchung immunometabolischer und mikroenvironmentaler Signalwege dar.
CAMP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CAMP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CAMP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CAMP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CAMP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.