Plasmide CRISPR d'Activation (h) CaMKII gamma: sc-400681-ACT

Le gène humain CAMK2G code CaMKII gamma, une sérine/thréonine kinase dépendante du Ca2+/de la calmoduline qui convertit les transitoires intracellulaires de calcium en programmes de phosphorylation régulant la plasticité synaptique, le couplage excitation–transcription, la dynamique du cytosquelette et le trafic vésiculaire. CaMKII gamma participe à la signalisation CaMK, avec des effets en aval sur la fonction des canaux ioniques, des réponses transcriptionnelles liées à CREB, ainsi qu’un dialogue croisé avec les voies MAPK et PI3K/AKT. Dans des contextes non neuronaux, CAMK2G contribue à la prolifération, à la migration et aux réponses au stress régulées par le calcium, ce qui soutient des rôles étendus dans le contrôle de l’état cellulaire. Une activité CaMKII et une signalisation calcique dérégulées ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi qu’à des réseaux de signalisation altérés en biologie des cancers, faisant de CAMK2G un nœud utile pour des études mécanistiques.

CaMKII gamma Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAMK2G sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CaMKII gamma Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAMK2G dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAMK2G, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CaMKII gamma. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAMK2G natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CaMKII gamma au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CaMKII gamma dans les cellules tumorales présentant une expression de CAMK2G silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.