Plasmide Double Nickase (h) CaMKII beta: sc-402744-NIC

CAMK2B code la sous-unité bêta de la CaMKII, une kinase sérine/thréonine dépendante du calcium/de la calmoduline qui convertit les transitoires intracellulaires de Ca2+ en événements de phosphorylation contrôlant la signalisation synaptique et la plasticité structurale. La CaMKII bêta contribue à l’assemblage de l’holoenzyme et aux interactions avec la F‑actine, reliant l’entrée de Ca2+ au remodelage du cytosquelette, à la dynamique des épines dendritiques et à l’expression génique dépendante de l’activité. Elle agit en aval de la signalisation glutamatergique et des voies d’entrée du Ca2+, en coordonnant des processus tels que la potentialisation à long terme et le développement neuronal. Une activité ou une expression dérégulée de la CaMKII bêta a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une excitabilité neuronale modifiée, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques de la fonction cérébrale et des réseaux de signalisation liés aux maladies.

CaMKII beta Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAMK2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAMK2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAMK2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAMK2B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.