Plasmide CRISPR d'Activation (h) CaMKIδ: sc-403073-ACT

CAMK1D code pour CaMKIδ, une kinase sérine/thréonine dépendante du Ca2+/calmoduline, qui convertit les transitoires de calcium intracellulaires en événements de phosphorylation façonnant l’expression génique et les décisions de destinée cellulaire. CaMKIδ participe à des réseaux de signalisation calcique qui croisent des programmes transcriptionnels liés à CREB, des réponses associées aux MAPK et la dynamique du cytosquelette, soutenant une régulation dépendante du contexte de la prolifération, de la différenciation et de la signalisation du stress. Des études génétiques et fonctionnelles associent CAMK1D à la régulation immunométabolique et à la signalisation inflammatoire, avec des liens rapportés à des phénotypes cardiométaboliques et à la susceptibilité à des maladies complexes dans lesquelles la signalisation dépendante du calcium est dérégulée. Ces caractéristiques font de CAMK1D un locus utile pour analyser comment l’activité kinase induite par le calcium influence les sorties transcriptionnelles en aval dans divers types cellulaires humains.

CaMKIδ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAMK1D sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CaMKIδ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAMK1D dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAMK1D, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CaMKIδ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAMK1D natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CaMKIδ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CaMKIδ dans les cellules tumorales présentant une expression de CAMK1D silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.