Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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calsequestrin 2 Double Nickase Plasmid (m): sc-419472-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das calsequestrin 2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- calsequestrin 2 Double-Nickase-Plasmid (m) und calsequestrin 2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Casq2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: calsequestrin 2: sc-390999
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
calsequestrin 2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419472-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
calsequestrin 2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419472-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Casq2 kodiert Calsequestrin 2, ein Ca²⁺-bindendes Protein mit hoher Kapazität, das im Lumen des sarkoplasmatischen Retikulums von Kardiomyozyten lokalisiert ist und dort die Ca²⁺-Speicher puffert und organisiert. Durch die Interaktion mit Ryanodinrezeptor-Komplexen und assoziierten junctionalen Proteinen trägt Calsequestrin 2 zur Ausgestaltung der Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung, der Ca²⁺‑induzierten Ca²⁺‑Freisetzung sowie der Dynamik der SR‑Ca²⁺‑Wiederauffüllung bei. Eine Störung der CASQ2‑Funktion ist mit einer fehlerhaften intrazellulären Ca²⁺‑Handhabung, verzögerten Nachdepolarisationen und stressgetriggerten arrhythmogenen Phänotypen verbunden und stellt damit einen zentralen Knotenpunkt in Signalwegen dar, die die Stabilität des Herzrhythmus steuern. Casq2 wird daher umfassend in Studien zu Mechanismen der SR‑Ca²⁺‑Homöostase, der Signalübertragung in Kardiomyozyten und in genetischen Modellen einer erblichen Arrhythmieanfälligkeit untersucht.
calsequestrin 2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Casq2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Casq2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Casq2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Casq2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.