Plasmide CRISPR d'Activation (h) Calponin 1: sc-401397-ACT

CNN1 code la calponine 1, une protéine régulatrice se liant à l’actine, enrichie dans le muscle lisse et dans des états de type myofibroblastique, où elle module la contractilité actomyosine. En se liant à l’actine filamentaire et en influençant l’activité ATPase de la myosine, la calponine 1 contribue à l’organisation du cytosquelette, à l’adhésion cellulaire et à la génération de forces contractiles, au sein de voies coordonnant la signalisation RhoA/ROCK et la dynamique des fibres de stress d’actine. Des variations de l’expression de CNN1 sont utilisées comme marqueur de la différenciation du muscle lisse et des changements phénotypiques, des processus pertinents pour le remodelage vasculaire et les réponses fibroprolifératives. Une dérégulation des programmes cytosquelettiques associés à la calponine 1 a été rapportée dans des contextes de rigidité et de motilité tissulaires anormales, ce qui soutient son utilisation dans des études sur la plasticité cellulaire et la mécanobiologie.

Calponin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CNN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calponin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CNN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CNN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calponin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CNN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calponin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calponin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CNN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.