Plasmide Double Nickase (h) Calpain 6: sc-407700-NIC

Le gène humain **CAPN6** code la calpaïne 6, un membre atypique de la famille des calpaïnes, majoritairement non protéolytique, qui agit davantage comme régulateur associé au cytosquelette que comme protéase classique dépendante du calcium. La calpaïne 6 influence la stabilité des microtubules, le remodelage de l’actine et la motilité cellulaire, en intégrant des signaux qui modulent la dynamique d’adhésion et le trafic intracellulaire. À travers ces fonctions, CAPN6 est étudié dans des voies qui contrôlent la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et le remodelage du cytosquelette en réponse au stress. Des altérations de l’expression ou de la régulation de CAPN6 ont été rapportées dans des contextes liés à la biologie tumorale, au remodelage vasculaire et aux processus du développement, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent dans les études portant sur la migration et les changements de phénotype.

Calpain 6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAPN6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAPN6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAPN6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAPN6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.