Calpain 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401113

概要

CAPN2はカルパイン2をコードしており、カルパイン2は広く発現するCa²⁺依存性のシステインプロテアーゼで、細胞骨格タンパク質やシグナル伝達タンパク質を限定的に切断して細胞構造を再編成します。カルパイン2の活性は、フォーカルアドヒージョンのターンオーバー、膜輸送、キナーゼ／ホスファターゼシグナルの調節に関与し、細胞の遊走・生存・ストレス応答を制御する経路と交差します。さらに、細胞周期進行やアポトーシスに関わる基質を制御下で切断することで、炎症や組織リモデリングの際のプロテオスタシスと適応的シグナル伝達の調整に寄与します。カルパイン2活性の破綻は、異常な運動性や浸潤性表現型、興奮毒性によるカルシウム流入に関連する神経変性過程、ならびに酸化ストレスや機械的ストレスに対する応答の変化と関連づけられています。

Calpain 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCAPN2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CAPN2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CAPN2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Calpain 2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Calpain 2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CAPN2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Calpain 2の機能に不可欠なCAPN2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CAPN2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Calpain 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCalpain 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CAPN2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Calpain 2 HDRプラスミド（h）および Calpain 2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCAPN2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCAPN2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。