Plásmido CRISPR de Activación (h) Calpain 10: sc-405032-ACT

CAPN10 codifica la calpaína 10, una proteasa de cisteína dependiente de calcio y expresada de forma ubicua, que modula la proteólisis limitada de sustratos intracelulares para regular el recambio proteico, la remodelación del citoesqueleto y la transducción de señales. La actividad de la calpaína 10 influye en la homeostasis mitocondrial, el metabolismo de la glucosa y los lípidos, y las vías sensibles al estrés mediante el control proteolítico de proteínas metabólicas y de señalización clave. La variación genética y la alteración de la expresión de CAPN10 se han asociado con fenotipos metabólicos, incluida la resistencia a la insulina y la susceptibilidad a la diabetes tipo 2, lo que respalda su relevancia en estudios de disfunción endocrina y mitocondrial. En investigación biomédica, CAPN10 se estudia con frecuencia por sus funciones en la bioenergética celular, la remodelación metabólica vinculada a la inflamación y la regulación específica por tejido de redes de proteasas.

Calpain 10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAPN10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Calpain 10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAPN10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAPN10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Calpain 10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAPN10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Calpain 10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Calpain 10 en células tumorales con expresión de CAPN10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.