Plasmide CRISPR d'Activation (h) CALHM1: sc-407600-ACT

CALHM1 (calcium homeostasis modulator 1) code un canal ionique de la membrane plasmique qui contribue à une conductance perméable au calcium et à la libération d’ATP, reliant des signaux extracellulaires à la dynamique intracellulaire du Ca2+ et à la signalisation purinergique. L’activité de CALHM1 influence l’excitabilité neuronale, la fonction synaptique et le couplage stimulus-sécrétion en modulant le potentiel de membrane et des cascades de signalisation dépendantes du Ca2+. Dans le système nerveux central, CALHM1 a été étudié dans le contexte des voies liées à l’amyloïde et de la signalisation neuro-inflammatoire, ce qui soutient sa pertinence pour la recherche mécanistique sur la neurodégénérescence et les phénotypes cognitifs. La régulation, via son canal, de l’efflux d’ATP en fait également une cible utile pour analyser la communication intercellulaire dans les tissus excitables et épithéliaux.

CALHM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CALHM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CALHM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CALHM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CALHM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CALHM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CALHM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CALHM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CALHM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CALHM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.