Plásmido Doble Nickase (h) Caldesmon: sc-402040-NIC

CALD1 codifica la caldesmona, una proteína de unión a actina y calmodulina que modula las interacciones actomiosina y estabiliza la arquitectura del citoesqueleto en músculo liso y en células no musculares. Al regular la dinámica de los filamentos de actina y la actividad ATPasa de la miosina de manera dependiente del calcio, la caldesmona coordina la organización de las fibras de estrés, el recambio de las adhesiones focales y las respuestas contráctiles que influyen en la forma celular y la motilidad. La función de CALD1 se interseca con la remodelación del citoesqueleto impulsada por las GTPasas Rho y con vías de señalización que acoplan la tensión mecánica a programas transcripcionales. La expresión alterada de caldesmona o el equilibrio entre sus isoformas se ha asociado con cambios en los fenotipos de migración e invasión celular en la biología del cáncer y con un comportamiento desregulado del músculo liso relevante para la remodelación vascular y procesos fibroproliferativos.

Caldesmon El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CALD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CALD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CALD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CALD1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.