Calcyclin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404300-ACT

S100A6 codifica la calciclina, una piccola proteina legante il Ca2+ di tipo EF-hand che funziona da sensore del calcio, collegando i segnali dinamici di Ca2+ ai cambiamenti nelle interazioni proteiche e nel comportamento cellulare. La calciclina si associa a fattori del citoscheletro e del traffico di membrana, come le annessine, e può modulare il rimodellamento dell’actina, la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione in risposta allo stress. È spesso studiata in contesti di proliferazione, migrazione e differenziamento, in cui sono state riportate alterazioni dell’espressione di S100A6 in molteplici tipi di tumore e nel rimodellamento tissutale associato a fibrosi e infiammazione. Queste proprietà rendono S100A6 un nodo utile per analizzare le reti regolatorie calcio-dipendenti e il loro impatto sulle transizioni di stato cellulare.

Calcyclin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di S100A6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Calcyclin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus S100A6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione S100A6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Calcyclin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus S100A6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Calcyclin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Calcyclin nelle cellule tumorali con espressione di S100A6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.