Plasmide CRISPR d'Activation (h) Calcyclin: sc-404300-ACT

S100A6 code la calcycline, une petite protéine de liaison au Ca2+ de type EF-hand qui agit comme capteur de calcium, reliant des signaux dynamiques de Ca2+ à des changements d’interactions protéiques et de comportement cellulaire. La calcycline s’associe à des facteurs du cytosquelette et du trafic membranaire tels que les annexines et peut moduler le remodelage de l’actine, la progression du cycle cellulaire et des voies de signalisation sensibles au stress. Elle est fréquemment étudiée dans des contextes de prolifération, de migration et de différenciation, où une expression altérée de S100A6 a été rapportée dans de nombreux types de tumeurs ainsi que dans le remodelage tissulaire associé à la fibrose et à l’inflammation. Ces propriétés font de S100A6 un nœud utile pour disséquer les réseaux régulateurs dépendants du calcium et leur impact sur les transitions d’état cellulaire.

Calcyclin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100A6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calcyclin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100A6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100A6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calcyclin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100A6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calcyclin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calcyclin dans les cellules tumorales présentant une expression de S100A6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.