Plasmide Double Nickase (h) Calbindin D28K: sc-400718-NIC

CALB1 code la calbindine D28K, une protéine cytosolique de liaison au Ca2+ à haute affinité, qui tamponne le calcium intracellulaire et façonne l’amplitude ainsi que la cinétique des transitoires de Ca2+. En modulant les voies de signalisation dépendantes du calcium, elle influence l’excitabilité neuronale, l’intégration synaptique et les programmes transcriptionnels dépendants de l’activité, et contribue à la résistance cellulaire face au stress médié par le Ca2+. La calbindine D28K est largement utilisée comme marqueur moléculaire de populations neuronales spécifiques et participe à des processus liés à l’homéostasie du calcium, à la fonction mitochondriale et aux réponses au stress oxydant. Des modifications des profils d’expression de CALB1 ont été rapportées dans des travaux en neurologie et en neuropsychiatrie, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques du fonctionnement des circuits et de la dérégulation du calcium.

Calbindin D28K Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CALB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CALB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CALB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CALB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.