Plásmido CRISPR de Activación (h) cadherin-8: sc-401576-ACT

CDH8 codifica la cadherina-8, un receptor clásico de adhesión célula–célula dependiente de calcio que media interacciones homofílicas para sostener la arquitectura tisular y la señalización dependiente del contacto. La cadherina-8 se asocia con complejos de cateninas en las uniones adherentes, conectando la membrana plasmática con el citoesqueleto de actina e influyendo en procesos como el crecimiento de neuritas, la organización sináptica y la migración celular. Mediante la modulación de la dinámica de adhesión y la estabilidad de las uniones, CDH8 contribuye a vías que coordinan la morfogénesis y la formación de circuitos en el sistema nervioso en desarrollo. La alteración de la expresión o la regulación de CDH8 se ha implicado en fenotipos del neurodesarrollo, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de conectividad, diferenciación y señalización impulsada por la adhesión.

cadherin-8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDH8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cadherin-8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDH8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDH8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cadherin-8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDH8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cadherin-8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cadherin-8 en células tumorales con expresión de CDH8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.