cadherin-26 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-436285-ACT

Il gene Cdh26 del topo codifica la caderina-26, una molecola di adesione cellula–cellula dipendente dal calcio appartenente alla superfamiglia delle caderine, che contribuisce all’organizzazione dei tessuti epiteliali e al mantenimento dell’integrità della barriera. Attraverso interazioni associate alle giunzioni aderenti, la caderina-26 sostiene la polarità cellulare, la segnalazione dipendente dal contatto e la regolazione coordinata delle dinamiche del citoscheletro, influenzando la differenziazione e il rimodellamento dell’epitelio. Alterazioni nei pattern di espressione delle caderine sono frequentemente collegate a cambiamenti di adesione, migrazione e risposte infiammatorie tissutali, rendendo Cdh26 un bersaglio utile per studiare l’omeostasi epiteliale e programmi di rimodellamento dipendenti dal contesto. Nei modelli murini, la modulazione di Cdh26 può aiutare a indagare come le reti di adesione si intersechino con vie di segnalazione dello sviluppo e dell’immunità nei tessuti di barriera.

cadherin-26 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cdh26 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cadherin-26 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cdh26 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cdh26, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cadherin-26. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cdh26 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cadherin-26 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cadherin-26 nelle cellule tumorali con espressione di Cdh26 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.