Plasmide CRISPR d'Activation (h2) cadherin-26: sc-401989-ACT-2

Le gène humain CDH26 code la cadhérine-26, une protéine d’adhésion intercellulaire dépendante du calcium qui contribue à l’organisation de la barrière épithéliale et à la stabilité des jonctions entre cellules via des interactions homophiles de cadhérines. L’activité de CDH26 s’inscrit au carrefour de réseaux de signalisation liés à l’adhésion, notamment le remodelage du cytosquelette et des voies associées aux jonctions qui façonnent l’architecture tissulaire et le dialogue immuno-épithélial. Des altérations de l’expression de CDH26 ont été rapportées dans des contextes inflammatoires et allergiques, ce qui encourage l’étude de son rôle en biologie des muqueuses, dans la fonction de l’épithélium des voies aériennes et du tractus gastro-intestinal, ainsi que dans le remodelage associé à la barrière. L’édition du gène CDH26 ou sa perturbation permet des études mécanistiques de la différenciation épithéliale, de la dynamique d’adhésion et des programmes transcriptionnels en aval, à l’aide de systèmes modèles humains pertinents in vitro et in vivo.

cadherin-26 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH26 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cadherin-26 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH26 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH26, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cadherin-26. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH26 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cadherin-26 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cadherin-26 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH26 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.