Plasmide CRISPR/Cas9 KO cadherin-24 (h): sc-401990

Présentation

CDH24 code la cadhérine-24, une protéine d’adhésion intercellulaire dépendante du calcium qui contribue à l’organisation des tissus épithéliaux en soutenant l’intégrité des jonctions d’adhérence et la signalisation dépendante du contact. Grâce à des interactions médiées par les cadhérines avec les caténines et le cytosquelette d’actine, la cadhérine-24 influence des processus tels que la polarité cellulaire, la fonction barrière et la migration cellulaire coordonnée. Des profils d’expression des cadhérines dérégulés peuvent modifier la cohésion intercellulaire et les réseaux de signalisation associés au remodelage épithélial et à des phénotypes liés à l’invasion. CDH24 présente donc un intérêt pour l’étude de la régulation, dépendante de l’adhésion, de l’architecture tissulaire et des changements du comportement cellulaire pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cadherin-24 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDH24 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDH24, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDH24 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cadherin-24.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDH24 pour l'étude de la signalisation de cadherin-24, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDH24 essentiels à la fonction de cadherin-24
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDH24 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cadherin-24 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le cadherin-24 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDH24. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cadherin-24 plasmide HDR (h) et le cadherin-24 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDH24 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDH24 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.