CA VI CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419456

概要

Car6は、分泌型の亜鉛メタロ酵素である炭酸脱水酵素VI（CA VI）をコードしており、CO₂の重炭酸イオンとプロトンへの可逆的な水和反応を触媒することで、腺組織や粘膜環境における細胞外pHの緩衝および重炭酸恒常性の維持を支えます。プロトン動態を形成することにより、CA VIは上皮のイオン輸送や微小環境のpH制御に関連する過程に寄与し、これらは酵素活性、細胞外マトリックスとの相互作用、細胞シグナル伝達に影響し得ます。マウス系では、Car6の発現は、分泌組織における炭酸脱水酵素依存的な細胞外酸塩基バランス調節を研究するためによく用いられます。pH制御の破綻は炎症、組織リモデリング、代謝ストレスのモデルと広く関係するため、Car6はpH感受性の表現型に関する機序解析に有用な標的となります。

CA VI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCar6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Car6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Car6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CA VIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CA VIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Car6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CA VIの機能に不可欠なCar6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Car6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CA VI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCA VI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Car6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CA VI HDRプラスミド（m）および CA VI HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCar6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCar6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。