C8A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406590

概要

C8Aは補体第8成分α鎖をコードしており、膜攻撃複合体（MAC）の形成と標的細胞の溶解を担う終末補体複合体（C5b-9）の中核サブユニットの一つです。自然免疫系の一部として、C8Aは古典経路、レクチン経路、代替経路の活性化に続く下流の補体系カスケードに関与し、オプソニン化、炎症シグナル伝達、免疫複合体の除去に影響を与えます。終末補体成分の異常は宿主防御の破綻や感染感受性の変化と関連しており、補体活性は炎症性・自己免疫関連の組織障害にも関与することが示されています。そのためC8Aは、補体介在性細胞傷害、血清の殺菌活性、免疫恒常性を制御する機構の研究において重要な標的となります。

C8A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるC8A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、C8A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、C8Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、C8Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、C8Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、C8A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• C8Aの機能に不可欠なC8Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、C8Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• C8A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびC8A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、C8A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  C8A HDRプラスミド（h）および C8A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはC8Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のC8A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。