Plasmide CRISPR d'Activation (h) C3aR: sc-401448-ACT

C3AR1 code le récepteur 1 du composant 3a du complément (C3aR), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie à l’anaphylatoxine C3a afin de relier l’activation du complément à la signalisation cellulaire. L’activation de C3aR déclenche des voies incluant un flux calcique médié par Gαi/Gαq, ainsi que les voies MAPK/ERK et PI3K, modulant la chimiotaxie des leucocytes, la libération de cytokines et l’activation des cellules myéloïdes. Ce récepteur intègre la détection de l’immunité innée à l’amplification de l’inflammation et peut influencer l’activation endothéliale et le remodelage tissulaire. Une activité dérégulée de C3AR1 a été impliquée dans la biologie des maladies inflammatoires et immuno-médiées, ce qui justifie son étude dans des modèles d’inflammation chronique et de pathologies pilotées par le microenvironnement.

C3aR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C3AR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C3aR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C3AR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C3AR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C3aR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C3AR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C3aR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C3aR dans les cellules tumorales présentant une expression de C3AR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.