C22orf25 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-414343

Descripción general

TANGO2 (C22orf25) codifica una proteína conservada implicada en la homeostasis energética celular, con funciones descritas que vinculan la actividad mitocondrial y el tráfico entre el retículo endoplásmico (RE) y el aparato de Golgi con una coordinación metabólica más amplia. La pérdida de actividad de TANGO2 se ha asociado con alteraciones del metabolismo oxidativo y de las respuestas de estrés celular, en consonancia con observaciones de cambios en la dinámica mitocondrial y una mayor sensibilidad ante demandas catabólicas. En biología humana, TANGO2 se estudia con mayor frecuencia en el contexto de fenotipos neurometabólicos, donde un manejo energético deficiente afecta a tejidos de alta demanda. Por ello, TANGO2 constituye una diana útil para analizar mecanismos que conectan el transporte intracelular, la fisiología mitocondrial y las vías adaptativas frente al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C22orf25 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TANGO2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TANGO2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TANGO2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C22orf25.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TANGO2 para la investigación de la señalización de C22orf25, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TANGO2 críticos para la función de C22orf25
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TANGO2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C22orf25 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido C22orf25 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TANGO2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C22orf25 (h) y el plásmido HDR C22orf25 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TANGO2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TANGO2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.