C1s Plasmide Double Nickase (h): sc-404794-NIC

C1S codifica per il componente del complemento C1s, una serin-proteasi modulare che agisce all’interno del complesso C1 per avviare la via classica del complemento. Una volta attivato, C1s scinde C4 e C2 generando la convertasi di C3, collegando il riconoscimento dei complessi immuni ai processi a valle di opsonizzazione e alla segnalazione infiammatoria. L’attività di C1s interseca cascate proteolitiche, la maturazione di proteine extracellulari e la regolazione dell’immunità innata, modulando le risposte citochiniche e la rimozione di materiale apoptotico. Un’attivazione disregolata della via classica del complemento e varianti genetiche che coinvolgono C1S sono state associate a infiammazione immunomediata, suscettibilità a infezioni ricorrenti e fenotipi di danno tissutale guidato dal complemento, a supporto della sua rilevanza nella ricerca in immunologia e biologia vascolare.

C1s Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus C1S nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di C1S. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di C1S. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con C1S interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.