C1s CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404794-ACT

Human C1S kodiert das Komplementprotein C1s, eine Serinprotease, die Teil des C1-Komplexes ist, der den klassischen Komplementweg einleitet. Nach der Aktivierung spaltet C1s C4 und C2 zur Bildung der C3-Konvertase und treibt damit Opsonisierung, die Clearance von Immunkomplexen sowie nachgeschaltete entzündliche Signalprozesse voran. Eine fehlregulierte C1s-Aktivität und Komplementaktivierung sind an immunvermittelten Gewebeschäden beteiligt und wurden mit Autoimmunphänotypen, entzündlichen Erkrankungen und komplementgetriebener Pathologie in Verbindung gebracht. C1S wird daher intensiv in der Forschung zur angeborenen Immunität, zur Regulation von Serinproteasen und zur Wechselwirkung zwischen Komplementkaskaden und zellulären Stressantworten untersucht.

C1s Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen C1S-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C1s Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des C1S-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der C1S-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C1s-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native C1S-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C1s-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C1s-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem C1S-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.