Plásmido CRISPR de Activación (h) c-Myb: sc-400752-ACT

MYB codifica el factor de transcripción c-Myb, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que controla programas relacionados con la proliferación, el compromiso de linaje y la diferenciación, en particular dentro de los compartimentos hematopoyético e inmunitario. c-Myb integra señales de citocinas y de redes transcripcionales del desarrollo para modular la progresión del ciclo celular, la supervivencia y la maduración mediante la regulación coordinada de genes diana aguas abajo. La actividad desregulada de MYB se ha asociado con estados de diferenciación alterados y con la persistencia de señales proliferativas en múltiples contextos relevantes para la malignidad, incluidas leucemias y linfomas, y también se ha implicado en la remodelación transcripcional en determinados tumores sólidos. Estas propiedades convierten a MYB en un nodo clave para analizar circuitos de regulación génica, transcripción dependiente de la cromatina y decisiones de destino celular específicas del contexto.

c-Myb El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

c-Myb El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de c-Myb. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de c-Myb en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía c-Myb en células tumorales con expresión de MYB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.