c-Jun CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-400077-KO-2

概要

JUNは、細胞外からの刺激を文脈依存的な遺伝子発現プログラムへと統合するAP-1転写因子複合体の中核成分であるc-Junをコードします。c-Junはストレス刺激や増殖因子（ミトジェン）シグナルによって迅速に誘導され、MAPK/JNKカスケード下流でのリン酸化により制御されます。これにより、増殖、分化、アポトーシス、炎症シグナル伝達を制御する転写応答が形成されます。AP-1依存的にサイトカイン、細胞外基質改変酵素、細胞周期制御因子などを調節することで、c-Junはシグナル伝達をクロマチンアクセシビリティと転写出力の変化へと結び付けます。JUN/AP-1活性の破綻は、がん化、腫瘍浸潤、免疫・神経炎症過程に関与することが示唆されており、ヒト疾患モデルにおける機構解析の重要な結節点となっています。

c-Jun CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるJUN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、JUN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、JUNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、c-Junタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、c-Junシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、JUN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• c-Junの機能に不可欠なJUNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、JUNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• c-Jun CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびc-Jun CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、JUN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  c-Jun HDRプラスミド（h）および c-Jun HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはJUNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のJUN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。