c-Fms/CSF-1R Double Nickase Plasmid (h): sc-400416-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das c-Fms/CSF-1R Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- c-Fms/CSF-1R Double-Nickase-Plasmid (h) und c-Fms/CSF-1R Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CSF1R abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: c-Fms/CSF-1R: sc-46662
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
c-Fms/CSF-1R Double Nickase Plasmid (h) | sc-400416-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
c-Fms/CSF-1R Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400416-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSF1R kodiert c-Fms/CSF-1R, eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die vorwiegend in mononukleären Phagozyten exprimiert wird und als Antwort auf den koloniestimulierenden Faktor 1 (CSF1) und IL-34 Überleben, Proliferation und Differenzierung steuert. Die ligandeninduzierte Dimerisierung aktiviert die Autophosphorylierung sowie nachgeschaltete PI3K–AKT-, RAS–MAPK- und JAK/STAT-Signalwege und koordiniert damit Makrophagen-Polarisierung, Chemotaxis und Gewebeumbau. Die CSF1R-Signalisierung ist zentral für die Osteoklastogenese und die Homöostase von Mikroglia und verbindet sie somit mit Knochenumsatz und neuroinflammatorischen Programmen. Eine fehlregulierte Aktivität des CSF1R-Signalwegs wird häufig in der Biologie tumorassoziierter Makrophagen und in Modellen entzündlicher Erkrankungen untersucht, in denen veränderte myeloide Signalgebung lokale Zytokinnetzwerke prägt.
c-Fms/CSF-1R Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CSF1R-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CSF1R abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CSF1R-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CSF1R-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.