Plasmide CRISPR d'Activation (m) c-Fgr: sc-420347-ACT

Le gène Fgr chez la souris code c-Fgr, une tyrosine kinase non réceptrice de la famille Src, enrichie dans les lignées myéloïdes, qui relaie des signaux en aval des immunorécepteurs, des intégrines et des signaux cytokiniques afin de coordonner les réponses immunitaires innées. c-Fgr participe à des cascades de phosphorylation qui régulent le remodelage du cytosquelette d’actine, l’adhésion et la migration cellulaires, la phagocytose et la production d’espèces réactives de l’oxygène, en s’intégrant à des voies telles que la signalisation via les récepteurs Fc et les réseaux de kinases inflammatoires. Une activité dérégulée des kinases de la famille Src, y compris une signalisation Fgr altérée, a été associée à une activation leucocytaire aberrante et à des phénotypes inflammatoires, ce qui fait de Fgr un nœud utile pour étudier l’homéostasie immunitaire et la fonction des cellules myéloïdes. En biologie du cancer, l’expression et la signalisation de Fgr sont également étudiées pour leurs rôles dans les cellules myéloïdes associées aux tumeurs et dans la dynamique de signalisation du microenvironnement.

c-Fgr Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fgr sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-Fgr Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fgr dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fgr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-Fgr. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fgr natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-Fgr au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-Fgr dans les cellules tumorales présentant une expression de Fgr silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.