C/EBP δ Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419624-ACT

Cebpd codifica il fattore di trascrizione C/EBP delta (CEBPδ), membro della famiglia delle proteine leganti CCAAT/enhancer (C/EBP), che coordina programmi di espressione genica responsivi agli stimoli nei compartimenti immunitario e stromale. Nelle cellule murine, C/EBPδ viene rapidamente indotto da segnali infiammatori e da stress cellulare, integrando la segnalazione proveniente da vie attivate da citochine e dalle reti trascrizionali a valle per regolare differenziamento, risposte di fase acuta e controllo del ciclo cellulare. Attraverso i suoi domini di legame al DNA e di transattivazione, C/EBPδ modella enhancer accessibili della cromatina e modula geni coinvolti nell’immunità innata, nel metabolismo e nel rimodellamento tissutale. Un’attività deregolata di Cebpd è stata associata a patobiologia infiammatoria e a stati proliferativi alterati, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici dei circuiti trascrizionali di risposta allo stress.

C/EBP δ Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cebpd senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C/EBP δ Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cebpd nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cebpd, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C/EBP δ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cebpd nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C/EBP δ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C/EBP δ nelle cellule tumorali con espressione di Cebpd silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.