C/EBP β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437357
- Specie Target: rat
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- C/EBP β Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (r) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico C/EBP β, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: C/EBP beta Antibody (H-7): sc-7962
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
C/EBP β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r) | sc-437357 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La proteina beta legante l’elemento CCAAT/enhancer (C/EBP β, Cebpb) è un fattore di trascrizione di tipo basic leucine zipper che coordina programmi genici che controllano la differenziazione mieloide, l’adipogenesi e le risposte di fase acuta degli epatociti nelle cellule di ratto. Integra segnali provenienti da vie infiammatorie e metaboliche, inclusa l’interazione tra JAK/STAT guidata da citochine e NF-κB, per regolare reti trascrizionali che modellano l’attivazione immunitaria, le risposte allo stress e la proliferazione cellulare. L’attività di C/EBP β influenza la polarizzazione dei macrofagi e l’espressione di geni lipogenici, collegandola a modelli sperimentali di infiammazione cronica, disfunzione metabolica e rimodellamento tissutale. La perturbazione della trascrizione dipendente da Cebpb è quindi ampiamente utilizzata per indagare i meccanismi alla base di fibrosi, resistenza all’insulina e dinamiche della segnalazione infiammatoria.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP β (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C/EBP β.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di C/EBP β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di C/EBP β
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal C/EBP β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal C/EBP β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal C/EBP β Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR C/EBP β (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.