C/EBP α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400195

Visão geral

CEBPA codifica o fator de transcrição C/EBPα, uma proteína do tipo zíper de leucina básica que se liga a elementos CCAAT/enhancer para coordenar programas de expressão gênica específicos de linhagem. É um regulador-chave da diferenciação hematopoética e mieloide, integrando sinais com o controle transcricional da parada do ciclo celular, da homeostase metabólica e da maturação granulocítica. O C/EBPα interage com vias que regulam a remodelação da cromatina e com redes transcricionais que envolvem sinalização por citocinas e outros reguladores mieloides, moldando o desenvolvimento da imunidade inata. A desregulação da expressão ou da função de CEBPA está associada a estados de diferenciação alterados e fenótipos proliferativos, o que o torna amplamente estudado em contextos como a biologia de malignidades hematológicas e decisões de destino de células-tronco/progenitoras.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO C/EBP α (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CEBPA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CEBPA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CEBPA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína C/EBP α.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CEBPA para a investigação da sinalização de C/EBP α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CEBPA críticos para a função C/EBP α
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CEBPA para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo C/EBP α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo C/EBP α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CEBPA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo C/EBP α Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR C/EBP α (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CEBPA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CEBPA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.