Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Btk Double Nickase Plasmid (h): sc-400603-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Btk Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Btk Double-Nickase-Plasmid (h) und Btk Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BTK abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Btk: sc-28387
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Btk Double Nickase Plasmid (h) | sc-400603-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Btk Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400603-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die Bruton-Tyrosinkinase (BTK; Btk) ist eine nichtrezeptorische Kinase der Tec-Familie, die Signale stromabwärts des B‑Zell-Rezeptors und mehrerer Immunrezeptoren weiterleitet, indem sie Aktivierungsreize an Phospholipase Cγ2, Calciumfluss, MAPK-, PI3K–AKT- und NF‑κB-Signalwege koppelt. In humanen hämatopoetischen Zellen trägt BTK zur Koordination der B‑Zell-Entwicklung, der antigengetriebenen Aktivierung, der Zytokinproduktion sowie der Antworten angeborener Immunrezeptoren in myeloischen Zelllinien bei. Eine fehlregulierte BTK-Signalübertragung wird mit Immundysfunktion in Verbindung gebracht und trägt zu krankheitsfördernden Überlebens- und Aktivierungsprogrammen in mehreren B‑Zell-Malignomen bei, weshalb BTK häufig als Knotenpunkt für mechanistische Studien der Lymphozytensignalgebung genutzt wird. BTK ist zudem mit Signalwegen verknüpft, die Zelladhäsion und Migration steuern, und unterstützt damit die Forschung zur Wanderung von Immunzellen und zu Interaktionen mit dem Mikromilieu.
Btk Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BTK-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BTK abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BTK-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BTK-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.