BTF3a/b Double Nickase Plasmid (h): sc-403520-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BTF3a/b Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BTF3a/b Double-Nickase-Plasmid (h) und BTF3a/b Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BTF3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BTF3a/b: sc-166093
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BTF3a/b Double Nickase Plasmid (h) | sc-403520-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BTF3a/b Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403520-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BTF3 kodiert den Basic Transcription Factor 3 und erzeugt die Isoformen BTF3a und BTF3b, die mit der RNA‑Polymerase II assoziieren und so die Initiation der Transkription sowie basale Genexpressionsprogramme unterstützen. Über seine Rolle in der Transkription hinaus wird BTF3 auch mit kotranslationalen Prozessen und der zellulären Proteostase in Verbindung gebracht, wodurch es mit der Regulation von Zellwachstum, Stressantworten und der Protein‑Homöostase verknüpft ist. Eine veränderte BTF3‑Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, darunter Krebserkrankungen, bei denen eine dysregulierte transkriptionelle Kontrolle Proliferations‑ und Überlebensphänotypen beeinflussen kann. Als breit wirkender, transkriptionsassoziierter Faktor wird BTF3a/b häufig in Signalwegen untersucht, die die Genauigkeit der Genexpression, die Zellzyklusdynamik und stressadaptive Signalübertragung steuern.
BTF3a/b Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BTF3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BTF3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BTF3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BTF3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.