Plásmido CRISPR de Activación (m) BTBD14B: sc-426213-ACT

El gen Nacc1 del ratón codifica el regulador transcripcional BTBD14B, una proteína que contiene un dominio BTB/POZ implicada en el control de la expresión génica asociado a la cromatina y en programas de identidad celular. NACC1 se ha relacionado con la regulación de la proliferación, la diferenciación y las respuestas transcripcionales adaptativas al estrés mediante interacciones con complejos correpresores y otros moduladores de la transcripción. En sistemas experimentales, la alteración de la actividad de Nacc1 se asocia con cambios en la progresión del ciclo celular, la susceptibilidad a la apoptosis y el estado metabólico, lo que la hace relevante para vías que con frecuencia se ven perturbadas en la oncogénesis y en la remodelación tisular. Estas propiedades respaldan su uso como un nodo mecanístico para estudiar la reconfiguración de redes transcripcionales y la lógica regulatoria génica dependiente del contexto en modelos murinos.

BTBD14B El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nacc1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BTBD14B El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nacc1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nacc1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BTBD14B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nacc1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BTBD14B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BTBD14B en células tumorales con expresión de Nacc1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.