BTBD14B Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426213-ACT

O Nacc1 de camundongo codifica o regulador transcricional BTBD14B, uma proteína que contém o domínio BTB/POZ e está implicada no controle, associado à cromatina, da expressão gênica e de programas de identidade celular. O NACC1 tem sido relacionado à regulação da proliferação, diferenciação e de respostas transcricionais adaptativas ao estresse por meio de interações com complexos correpressores e outros moduladores transcricionais. Em sistemas experimentais, a atividade alterada de Nacc1 está associada a mudanças na progressão do ciclo celular, na suscetibilidade à apoptose e no estado metabólico, tornando-o relevante para vias frequentemente perturbadas na oncogênese e no remodelamento tecidual. Essas propriedades sustentam seu uso como um nó mecanístico para estudar a reorganização de redes transcricionais e a lógica de regulação gênica dependente do contexto em modelos murinos.

BTBD14B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nacc1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BTBD14B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nacc1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nacc1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BTBD14B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nacc1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BTBD14B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BTBD14B em células tumorais com expressão de Nacc1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.