Plasmide CRISPR d'Activation (h) BSEP: sc-400742-ACT

ABCB11 code la pompe d’export des sels biliaires humaine (BSEP), un transporteur de la famille ABC (ATP-binding cassette) localisé à la membrane canaliculaire des hépatocytes, qui assure l’efflux des acides biliaires vers la bile de manière dépendante de l’ATP. Cette activité de transport est centrale pour l’homéostasie des acides biliaires et la circulation entérohépatique, en influençant la gestion des lipides hépatiques et les processus de détoxification. La fonction d’ABCB11 s’intègre aux voies de détection des acides biliaires, notamment aux réseaux transcriptionnels régulés par FXR, qui coordonnent la synthèse et le transport des acides biliaires. Une activité de BSEP dérégulée ou diminuée est associée à des phénotypes cholestatiques et à un stress hépatocellulaire induit par l’accumulation intracellulaire d’acides biliaires, faisant d’ABCB11 une cible majeure pour l’étude de la formation de la bile et de la signalisation médiée par les acides biliaires.

BSEP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCB11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BSEP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCB11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCB11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BSEP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCB11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BSEP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BSEP dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCB11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.