Plasmide Double Nickase (h) BRD4: sc-400519-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BRD4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BRD4 Double Nickase (h) et le plasmide BRD4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BRD4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BRD4 Antibody (A-7): sc-518021
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BRD4 | sc-400519-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BRD4 | sc-400519-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRD4 (bromodomain containing 4) est un lecteur de chromatine de la famille BET qui reconnaît les lysines acétylées sur les queues d’histones afin de réguler l’élongation transcriptionnelle et l’activité des enhancers. Il coordonne le recrutement de P-TEFb et de l’ARN polymérase II, reliant l’état de la chromatine à l’expression de gènes contrôlant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation inflammatoire. BRD4 agit de manière marquée au niveau des super-enhancers et module des programmes tels que la transcription pilotée par MYC, ce qui en fait un nœud clé de la régulation épigénétique. Une activité dérégulée de BRD4 et des paysages d’enhancers altérés sont associés à des phénotypes prolifératifs et inflammatoires et ont été étudiés dans de multiples contextes liés au cancer et à l’immunité.
BRD4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BRD4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BRD4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BRD4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BRD4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.