Plásmido CRISPR de Activación (h) BRD2: sc-402584-ACT

BRD2 (proteína 2 que contiene bromodominio) es un lector de cromatina de la familia BET que se une a lisinas acetiladas en las colas de las histonas mediante bromodominios en tándem para coordinar el inicio y la elongación de la transcripción. Al acoplar la actividad de promotores y potenciadores (enhancers) al reclutamiento de complejos reguladores de la transcripción, BRD2 ayuda a controlar la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y programas de expresión génica específicos de linaje. La regulación de la cromatina dependiente de BRD2 se intersecta con redes transcripcionales oncogénicas y vías de señalización inflamatoria, lo que lo convierte en un nodo ampliamente estudiado del control epigenético de la proliferación y la transcripción adaptativa al estrés. La actividad desregulada de las proteínas BET, incluida la función alterada de BRD2, se ha asociado con la expresión aberrante de genes de crecimiento y de respuesta inmunitaria en múltiples contextos relevantes para la enfermedad.

BRD2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BRD2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BRD2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BRD2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BRD2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BRD2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BRD2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BRD2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BRD2 en células tumorales con expresión de BRD2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.