BRCA1 Double Nickase Plasmid (r): sc-437320-NIC
- Zielspezies: rat
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BRCA1 Double Nickase Plasmid (r) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BRCA1 Double-Nickase-Plasmid (r) und BRCA1 Double-Nickase-Plasmid (r2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BRCA1: sc-135732
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BRCA1 Double Nickase Plasmid (r) | sc-437320-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BRCA1 Double Nickase Plasmid (r2) | sc-437320-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRCA1 kodiert einen multifunktionalen Tumorsuppressor, der die Aufrechterhaltung des Genoms steuert, indem er die homologe Rekombinationsreparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen, den Schutz von Replikationsgabeln und die Kontrolle von Zellzyklus-Checkpoints koordiniert. In Rattenzellen wirkt BRCA1 innerhalb der BRCA1–PALB2–BRCA2-Achse, um die Beladung von RAD51 zu fördern, und ist an Signalwegen der DNA-Schadensantwort beteiligt, die von den Kinasen ATM/ATR gesteuert werden. Der Verlust oder die Beeinträchtigung von BRCA1 stört chromatinassoziierte Reparaturprozesse, erhöht die genomische Instabilität und sensibilisiert Zellen gegenüber Replikationsstress. Diese Mechanismen machen BRCA1 zu einem zentralen Knotenpunkt für Untersuchungen der Wahl von DNA-Reparaturwegen, der mitotischen Genauigkeit und krebsrelevanter Phänotypen der Genomintegrität in Nagetiermodellen.
BRCA1 Das Double-Nickase-Plasmid (r) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des -Lokus in rat-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die -Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit -Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.