Plasmide CRISPR d'Activation (h) BRCA1: sc-400093-ACT

BRCA1 code une protéine suppresseur de tumeur qui agit comme un coordinateur central du maintien du génome, en assurant la détection des dommages à l’ADN, la réparation par recombinaison homologue et la protection des fourches de réplication. BRCA1 participe au contrôle des points de contrôle (checkpoints) et à des complexes de réparation associés à la chromatine, en intégrant la signalisation des voies ATM/ATR afin de préserver la stabilité génomique après des cassures double brin. Elle contribue également à la régulation transcriptionnelle et à des processus médiés par l’ubiquitine qui influencent la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress. Une activité de BRCA1 dérégulée est fortement associée à une capacité de réparation de l’ADN diminuée et à une instabilité génomique accrue, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques en biologie du cancer et en recherche sur la réparation de l’ADN.

BRCA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BRCA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BRCA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BRCA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BRCA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BRCA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BRCA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BRCA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BRCA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de BRCA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.