Plasmide Double Nickase (h) BRAF: sc-400121-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BRAF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BRAF Double Nickase (h) et le plasmide BRAF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BRAF. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BRAF Antibody (F-7): sc-5284
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BRAF | sc-400121-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BRAF | sc-400121-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRAF code une protéine kinase sérine/thréonine qui agit comme un effecteur clé en aval de RAS, assurant la propagation du signal au sein de la cascade RAF–MEK–ERK/MAPK. En régulant, via des mécanismes dépendants de la phosphorylation, le contrôle de programmes transcriptionnels, la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la survie, BRAF intègre des signaux extracellulaires pour orchestrer des réponses cellulaires coordonnées. Une activité dérégulée de BRAF est associée à une signalisation MAPK aberrante et à une altération du contrôle de la croissance dans de multiples contextes pertinents pour la maladie, ce qui en fait une cible couramment utilisée pour disséquer les réseaux de signalisation oncogéniques. Chez l’humain, BRAF est donc fréquemment étudié dans la cartographie des voies, les études génotype–phénotype, ainsi que l’analyse des rétrocontrôles de signalisation et des interactions (crosstalk) avec les voies PI3K/AKT et de réponse au stress.
BRAF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BRAF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BRAF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BRAF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BRAF.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.