Plásmido CRISPR de Activación (m) bradykinin B2 R: sc-419318-ACT

El gen Bdkrb2 de ratón codifica el receptor B2 de bradicinina (bradykinin B2 R), un GPCR expresado de forma constitutiva que media las respuestas a las cininas en tejidos vasculares e inflamatorios. Tras la unión del ligando, se acopla principalmente a Gαq/11 y Gαi/o para activar PLCβ, elevar el Ca2+ intracelular, estimular PKC y activar la señalización de óxido nítrico y prostaglandinas, que regulan la vasodilatación, la permeabilidad vascular y el tono del músculo liso. La señalización dependiente de Bdkrb2 se entrecruza con programas vinculados a MAPK y NF-κB que modulan el reclutamiento de leucocitos, la formación de edema y la sensibilización al dolor. La actividad desregulada del receptor B2 se estudia con frecuencia en modelos de homeostasis cardiovascular, inflamación neurogénica y fisiología renal, donde puede influir en la remodelación tisular y la carga inflamatoria.

bradykinin B2 R El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Bdkrb2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

bradykinin B2 R El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Bdkrb2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Bdkrb2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de bradykinin B2 R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Bdkrb2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de bradykinin B2 R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía bradykinin B2 R en células tumorales con expresión de Bdkrb2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.