brachyury CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423247

概要

マウスのT遺伝子は、Tボックス型転写因子であるbrachyury（ブラキュリー）をコードしており、胚発生における中胚葉形成、原始線条の進行、ならびに後方体軸の発達に必須である。Brachyuryは系譜特異化プログラムを制御し、細胞運命の決定、組織パターニング、形態形成運動を担う転写ネットワークを統合・協調させるとともに、WNT、FGF、TGF-β/SMAD経路などのシグナル入力と連携する。Brachyury活性の破綻は、異常な間葉系分化や上皮間葉転換（EMT）関連遺伝子発現と関連づけられており、発生異常および疾患に伴う転写リプログラミングとの関わりを示唆している。

brachyury CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、T内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、brachyuryタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、brachyuryシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、T欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• brachyuryの機能に不可欠なTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• brachyury CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびbrachyury CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、T遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  brachyury HDRプラスミド（m）および brachyury HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。